Topsil色譜柱說明書

色譜柱使用
1.取出色譜柱，仔細查看柱身洗脫液流向箭頭標識，用手旋下柱兩(liang) 端的塑料堵頭，放好色譜柱，使洗脫液流向和柱身所示流向一致，如圖所示：

2.用手將“連接管路的不鏽鋼或者其它材質的接頭”旋入色譜柱兩(liang) 端，管路接頭要和色譜柱接口連接緊密，確保零死體(ti) 積連接，在色譜儀(yi) 正常運行時沒有漏液。

色譜柱保存
1.短期保存：間隔不超過四天，色譜柱按平時維護程序衝(chong) 洗至基線平穩，反相色譜柱保存在不帶有緩衝(chong) 鹽、離子對試劑的有機相/水溶液中，有機相不低於(yu) 20%；正相色譜柱正相使用保存在純正己烷中，反相使用保存在純有機溶劑中；並將隨柱的塑料堵頭旋緊密封。

2.長期保存：反相色譜柱保存在80%甲醇或80%乙腈水溶液中；正相色譜柱正相使用保存在純正己烷中，反相使用時需將柱內(nei) 存儲(chu) 液用異丙醇置換，zui後用正己烷保存。將色譜柱從(cong) 儀(yi) 器上取下，並將隨柱的塑料堵頭旋緊密封。

使用注意事項
星空体育全站是液相色譜儀(yi) 的心髒，有嚴(yan) 格的生產(chan) 標準和測試程序，為(wei) 了充分發揮其性能，zui大程度延長其壽命，請仔細閱讀此部分。
1.色譜柱使用前請先確認色譜柱內(nei) 的存儲(chu) 液
月旭公司色譜柱的存儲(chu) 液，如沒有特殊說明均為(wei) 質檢報告中所述流動相，氨基（NH2）、矽膠柱（SiO2）均為(wei) 正相條件-正己烷/異丙醇體(ti) 係，反相柱(C8、C18、Phenyl-Hexyl)均為(wei) 甲醇/水體(ti) 係，檢測前，請用相互溶的試劑將其替換。
2.新的色譜柱平衡
月旭公司建議新的反相色譜柱用色譜級的純甲醇以低流速衝(chong) 洗色譜柱30個(ge) 柱體(ti) 積，再更換成能與(yu) 檢測流動相互溶的流動相衝(chong) 洗30個(ge) 柱體(ti) 積，zui後用流動相穩定係統至基線平穩；新的正相色譜柱用色譜級的異丙醇以低流速衝(chong) 洗30個(ge) 柱體(ti) 積，再更換成檢測流動相穩定係統至基線平穩。
3.色譜柱的使用方向確認
月旭公司生產(chan) 的星空体育全站標簽上的箭頭方向為(wei) 流動相流向，使用過程按此方向可以避免雙向混用，導致兩(liang) 端填料同時汙染，不利於(yu) 色譜柱的再生和維護。
4.流動相和樣品保持潔淨
由於(yu) 懸浮在樣品或流動相中的細小顆粒會(hui) 堵塞色譜柱兩(liang) 端的篩板，月旭公司建議各種試劑選用色譜純級；如有少量的分析純試劑，使用前建議用0.45μm孔徑以下的濾膜過濾。

樣品中的雜質是造成色譜柱汙染、柱效下降的zui主要原因之一，複雜樣品可選樣品預處理柱（SPE柱）進行樣品處理。如果不方便處理，使用相匹配的保護柱，樣品溶劑與(yu) 流動相要相匹配。不能出現樣品不互溶，極性相差太大等想象，否則會(hui) 造成色譜峰形變差，鬼峰等現象，使用流動相溶解樣品能有效的避免上述情況發生。

5.色譜柱允許的pH範圍
每款色譜柱都有自己特定允許使用的pH範圍，在pH範圍以外使用，會(hui) 使矽膠基質溶解或鍵合相水解，對色譜柱造成不可恢複的損傷(shang) 。如果在臨(lin) 界pH處使用，分析結束後立即用適合於(yu) 色譜柱保存並與(yu) 當前使用的流動相互溶的淋洗液置換掉。

TopsilTM 係列色譜柱pH耐受範圍：

色譜柱維護
1.柱壓升高
這是每個(ge) 色譜工作者都很頭疼的問題，長時間使用造成柱壓的緩慢升高通常是正常現象；短時間甚至是突然的柱壓升高通常是異常升高，排除儀(yi) 器的故障，確定是色譜柱自身原因，一般有以下幾點：
1) 柱頭的過濾篩板汙染(固體(ti) 顆粒物堵塞、強保留物質累積)，解決(jue) 方法
為(wei) ：
a.在柱前端加上在線過濾器或保護柱，用甲醇/水=20/80 1.0ml/min反向衝(chong) 洗色譜柱180min；
b.在柱前端加上在線過濾器或保護柱，反向使用；
c.可將柱頭打開，將色譜柱頭中過濾篩板取出，在稀硝酸溶液內(nei) 超聲清洗20min，純水超聲清洗20min，zui後用甲醇超聲清洗20min，重新裝入色譜柱。
2) 柱頭填料汙染(固體(ti) 顆粒物堵塞、強保留物質累積)，解決(jue) 方法為(wei) ：
a.用可以溶解汙染物的溶劑較長時間(180min)反向衝(chong) 洗色譜柱；
b.可將柱頭打開，小心取出被汙染的填料，用相同的填料重新裝入修複。
3) pH使用不當造成的損傷(shang) ：
pH使用不當造成固定相的缺失或塌陷，很難使色譜柱恢複，隻能更換色譜柱。

2.使用保護柱和在線過濾器
樣品和流動相中不能*過濾掉及泵磨損、密封圈和管路老化產(chan) 生的固體(ti) 顆粒物，進入到色譜柱中就會(hui) 堵塞篩板，導致柱壓升高，柱效下降，保護柱和在線過濾器上都有篩板，孔徑與(yu) 分析柱的孔徑相同，能阻止顆粒物到達色譜柱，在分析故障中，柱壓升高占很大比例，因此建議您在色譜柱前端加上在線過濾器或者保護柱。
3.緩衝(chong) 鹽的正確使用
緩衝(chong) 鹽通常易溶於(yu) 水，難溶於(yu) 有機溶劑，使用不當會(hui) 析出，加快泵柱塞杆和密封圈，流通閥的磨損，堵塞色譜柱頭篩板，填料基質上的微孔和顆粒間的間隙，使填料板結柱壓升高，阻礙基質上鍵合相的碳鏈自由舒展，使色譜柱保留能力下降，柱效降低，縮短其使用壽命，緩衝(chong) 鹽析出後很難去除，因此正確的使用緩衝(chong) 鹽對延長色譜柱的使用壽命非常重要，具體(ti) 方法如下：“使用前過渡! 使用後衝(chong) 洗!”

1) 等度條件：分析前後用過渡流動相衝(chong) 洗柱體(ti) 積不少於(yu) 20-30個(ge) 柱體(ti) 積，或分析完成後用過渡流動相以0.2ml/min（根據柱規格調整）衝(chong) 洗過夜；
2) 梯度條件：分析前，用與(yu) 初始流動相組成相同的流動相以分析流速衝(chong) 洗色譜柱不少於(yu) 20-30個(ge) 柱體(ti) 積，分析後，用該過渡流動相衝(chong) 洗色譜柱不少於(yu) 20-30個(ge) 柱體(ti) 積，且梯度盡量平緩，避免緩衝(chong) 鹽析出；
過渡流動相：有機相和水相的比例和分析流動相中兩(liang) 相比例一致，或者水相比例高於(yu) 分析流動相，不含緩衝(chong) 鹽。
3) 緩衝(chong) 鹽析出：
方案1：用甲醇/水＝10/90以分析速度流速35℃條件下反向衝(chong) 洗色譜柱120min；
方案2：用甲醇/水＝10/90以0.2ml/min流速反向衝(chong) 洗色譜柱過夜。

4.避免強保留物質在色譜柱保留
強保留物質和大分子化合物在色譜柱中累積，是一個(ge) 緩慢的過程，一段時間後會(hui) 對樣品成分產(chan) 生額外的保留行為(wei) ，引起峰變寬，拖尾，使柱效下降，保留時間變化，到一定程度時會(hui) 導致柱壓升高，對許多樣品特別是複雜樣品很難判斷其是否含有強保留物質，因此要預防這一切的方式，堅持每天分析完成後用純甲醇或純乙腈反向衝(chong) 洗色譜柱20個(ge) 柱體(ti) 積以上。

清洗方法：
1) 未使用緩衝(chong) 鹽，每天分析完成後用純甲醇或純乙腈反向衝(chong) 洗色譜柱20個(ge) 柱體(ti) 積以上；
2) 使用緩衝(chong) 鹽，用上述方法去除緩衝(chong) 鹽後，用純甲醇或純乙腈反向衝(chong) 洗色譜柱20個(ge) 柱體(ti) 積以上；
3) 補救方法：水–乙腈–異丙醇（或氯仿）–乙腈–水，每一步需要衝(chong) 洗不少於(yu) 30個(ge) 柱體(ti) 積。
注意：不要輕易打開柱頭，一旦打開，很難恢複到新柱的水平。因為(wei) 柱頭打開而造成的檢測後果，客戶自行負責。

色譜柱再生
色譜柱作為(wei) 液相色譜中昂貴的色譜耗材，會(hui) 隨著使用時間和進樣次數的增加，會(hui) 出現異常的色譜現象，如果一根色譜柱的柱效太低或者柱壓太高，通常認為(wei) 該色譜柱使用壽命已到，為(wei) 了延長色譜柱的使用壽命，除了*按照每一款色譜柱的性能使用以外，適當的色譜柱再生是很有效的途徑。
1.氰基（CN）色譜柱維護和再生
CN基柱屬於(yu) 中等極性的固定相，作反相色譜時操作和維護和C18柱*相同，增加水相比例，可以促進樣品的洗脫。但是CN屬於(yu) 短鏈的鍵合相，水相比例太高易使CN鍵水解，尤其在色譜柱pH耐受範圍以外，酸性和堿性條件下柱壽命會(hui) 下降很快。如果在這個(ge) 條件下使用，需要按以下程序用15個(ge) 柱體(ti) 積溶液衝(chong) 洗，如下：95%水/5%乙腈–THF四氫呋喃–95%乙腈/5%水並保持95%乙腈/5%水繼續衝(chong) 洗，以低流速0.2-0.5mL/min過夜衝(chong) 洗。
在pH耐受範圍條件使用時，也比較傷(shang) 柱子，要注意衝(chong) 洗，可以參照上述方法，時間可適當減少。柱子使用一定時間後，柱效下降，需要老化再生，再生時用15個(ge) 柱體(ti) 積的下列溶液衝(chong) 洗：95%水/5%乙腈–THF四氫呋喃–95%乙腈/5%水再走流動相即可。

CN柱用於(yu) 正相時，當柱子使用一定時間後，柱效下降，可清洗一下恢複柱性能，再生時用10個(ge) 柱體(ti) 積的下列溶液衝(chong) 洗：氯仿–異丙醇–二氯甲烷再走流動相即可。
CN柱的pH範圍在pH 2.0-8.0。
CN柱的保存，可用異丙醇或正己烷保存（保存溶劑中不能含水），兩(liang) 端封好，流動相改變時要注意過渡和兩(liang) 相之間的互溶。

2.反相柱再生
反相色譜柱是使用zui普遍的色譜柱之一，除按照以上內(nei) 容使用以外，必要的再生清洗可以有效的延長色譜柱的使用壽命，用下列每種溶劑20~30個(ge) 柱體(ti) 積衝(chong) 洗：
100％甲醇–100％乙腈–75％乙腈/25％異丙醇–100％異丙醇 –100％二氯甲烷–100％正己烷–100％異丙醇–100％甲醇
3.正相色譜柱的再生
正相氨基柱的鍵合官能團氨丙基要比C18、C8柱的鍵合官能團易水解，所以其使用壽命稍短，特別是使用反相條件時，要嚴(yan) 格控製pH值範圍，pH值越低流動相中水的比例越高越易發生水解。
注意：所有試劑都要嚴(yan) 格脫水

用氨基柱檢測酸性物質可能會(hui) 使略帶負電荷的氨基官能團質子化，一定程度上改變對某類的分析物保留性質或表現為(wei) 柱效下降，再生建議是：

用5-10個(ge) 的柱體(ti) 積的含0.5-1.0％NH3的50-50乙腈-水溶液衝(chong) 洗（衝(chong) 洗後用不含堿的流動相洗去多餘(yu) 的氨），分析酸性分析物時建議在流動相中略微添加少許氨如0.1％。
填料被樣品中雜質累積汙染，色譜柱表現行為(wei) 柱壓增高柱效降低等，依次用：甲醇–異丙醇–氯仿–正己烷–氯仿–異丙醇–甲醇衝(chong) 柱子（各以0.5ml/min的流速，20個(ge) 柱體(ti) 積），再換流動相。
NH2柱用於(yu) 反相條件時，NH2鍵會(hui) 水解，尤其是在該柱子pH範圍以外，在酸性和堿性條件下柱壽命會(hui) 下降很快，如果在這個(ge) 條件下使用需要清洗一下，需要用10個(ge) 柱體(ti) 積溶液衝(chong) 洗，也是正相條件下使用色譜柱的再生，建議：95％水/5％乙腈–THF四氫呋喃–95％乙腈/5％水，並保持95％乙腈/5％水繼續衝(chong) 洗，以低流速0.2-0.5mL/min過夜衝(chong) 洗。

反相使用氨基色譜柱的再生（每種淋洗液不少於(yu) 30個(ge) 柱體(ti) 積）：NaOH(pH 9.0)–色譜純水衝(chong) –平衡到流動相或者適合保存的溶液。
其它正相柱（矽膠柱，Diol柱）的再生（每種淋洗液不少於(yu) 20個(ge) 柱體(ti) 積）：正己烷–異丙醇。
正相柱除水：含2.5% 二甲氧基丙烷(dimethoxypropane)和2.5%冰醋酸的正己烷衝(chong) 洗30個(ge) 柱體(ti) 積。