液相色譜，你問我答（十一）

答：有時候換色譜係統時梯度方法會(hui) 出現一些問題。除非係統*一樣，否則保留時間總有些變化。通常這個(ge) 時間的變化都在分離度的範圍之內(nei) ，忽略它，方法還是可以用的。另外，如果適當了解潛在的原因，可以調節梯度在不同的色譜係統中得到相同的效果。

另一個(ge) 涉及到這個(ge) 問題的是梯度滯後體(ti) 積。它是從(cong) 梯度混合處到柱頭的體(ti) 積。當你進樣開始分析後，梯度並沒有到達柱頭，還要等滯後體(ti) 積排空後才到。這就是說樣品在開始一段時間是等度遷移的。由於(yu) 不同係統的滯後體(ti) 積是不同的，所以保留時間就不一樣了，有時候還是影響到分離度。

另一個(ge) 原因是梯度本身，由係統與(yu) 係統之間的組分差異導致。對於(yu) 現在大部分的色譜廠家來說這個(ge) 問題都不是很嚴(yan) 重。但通常，在輸送等比例的流動相時（50%A和50%B）精確度最高，比例相差大時（5%A或95%A）精確度就會(hui) 受損。

答：zui簡單的做法是比較一下兩(liang) 個(ge) 係統的梯度。卸掉柱子，接雙通。（在梯度的B溶液後接紫外檢測器）如果用的是反相色譜，可以在B溶液中加10mg/L的對羥基苯甲酸丙酯。兩(liang) 個(ge) 係統都開始運行梯度，記錄基線。然後比較一下兩(liang) 張圖譜。要找到梯度開始的位置，測量梯度圖譜。如果梯度是線性的，隻要測量梯度的斜率就可以了。

很可能你會(hui) 發現兩(liang) 台儀(yi) 器的梯度開始時間不一樣，圖譜非常類似，梯度結束時間有一定的改變。這種情況就是說兩(liang) 台儀(yi) 器的梯度滯後體(ti) 積不一樣。

答：有一個(ge) 辦法大部分時候可以采用。如果新係統的梯度滯後體(ti) 積小於(yu) 轉移前係統的體(ti) 積，可以在梯度開始加一段等度。如果新係統滯後體(ti) 積大，這種情況就比較困難。原則上你可以先開梯度，延後一段時間進樣，這段時間要與(yu) 兩(liang) 台儀(yi) 器的滯後時間差一致。但在自動係統中就不能這麽(me) 做，自動係統中是進樣觸發梯度開始的，這時候可能需要手動基線歸零或重新開發方法。

答：你可以在最終使用的儀(yi) 器上開發方法。這可能需要一些預見與(yu) 計劃，但通常還是可行的。你需要做的是了解新係統的性能，要知道係統的兩(liang) 個(ge) 基本情況：梯度滯後體(ti) 積和比例精確性。你可以在同一個(ge) 實驗裏得到這兩(liang) 個(ge) 數據：如前所述，在B溶液後加紫外檢測器，設置一個(ge) 多階層的梯度，B溶液以5%的幅度從(cong) 0%變到100%，流速與(yu) 平常一樣，應該是1mL/min吧。每段梯度大概保持5min。然後接雙通運行梯度，記錄圖譜。每段梯度設置的時間與(yu) 實際發生的梯度時間之差就是梯度延遲時間。階層的高度可以用來測量流動相比例。這些階層可能有點模糊，那是由係統中混合體(ti) 積造成的。 

檢測完係統，就可以按照它的性能來設計方法了。正如我前麵提到的，最大的問題是梯度滯後體(ti) 積。如果你知道新儀(yi) 器的滯後體(ti) 積比開發方法的儀(yi) 器大，就要自覺的在方法前加一段等度來抵消這一差別。如果目標係統滯後體(ti) 積小，你就要在轉移方法的時候在方法開始加一段梯度延遲時間。

如果比例差別是在梯度運行中間出現的，相信你也可以通過調節梯度圖譜來抵消這種差別。

這個(ge) 討論是假設柱子已經用初始流動相充分平衡了。有時我會(hui) 遇到這樣一些情況，在日常分析中，梯度變化很快，而柱子沒有用初始流動相平衡好。這樣第一針時總是與(yu) 後麵的不一樣。這可能是加快方法的缺點，但是如果轉移到有不一樣滯後體(ti) 積的係統時，可能就會(hui) 產(chan) 生一些問題。