色譜柱過載就是那麽回事

很多小夥(huo) 伴在選擇星空体育全站時都會(hui) 提到一個(ge) 問題：“這根色譜柱能上多大的樣品量？”誠然，小夥(huo) 伴們(men) 在做分析方法開發時都會(hui) 竭力避免色譜柱過載。因為(wei) 柱子的過載會(hui) 造成色譜峰峰形失真，以及理論塔板數過低的問題。

特別是小夥(huo) 伴做有關(guan) 物質方法開發中，經常會(hui) 遇到一組分析物中同時包含了較高濃度的主成分（也就是藥物活性成分）和很低濃度的雜質（包括工藝雜質及降解雜質）。而為(wei) 了兼顧低濃度雜質的靈敏度，必然要增大進樣體(ti) 積，或者提高進樣濃度，確保定量的準確性。因此，某些時候就會(hui) 造成色譜柱的過載。

色譜柱的過載又可以分為(wei) 質量過載和體(ti) 積過載，這裏小編就和各位小夥(huo) 伴聊聊過載的那些事。

質量過載

質量過載又稱為(wei) 濃度過載，就是指在小體(ti) 積進樣時（體(ti) 積未過載），由於(yu) 進樣濃度較高，靠近譜峰峰帶的固定相被飽和，也就是說，進樣某一組分超過了色譜柱的載樣量而出現過載的現象。一般表現為(wei) 色譜峰峰形拖尾，柱效較低。

在小體(ti) 積進樣時，如果質量未超載，隨著樣品量的增加（a<b<c），譜峰麵積相應增加（Aa<Ab<Ac），但是峰寬並沒有隨之增加。譜峰也顯正常。

圖1

隨著樣品量繼續增加，進到色譜柱中的樣品達到飽和，譜峰就變形了。

圖2

從(cong) 圖2可以看出，隨著進樣質量不斷增加，譜峰峰寬不斷增加，z終變成了直角三角形的形狀，同時譜峰的理論塔板數也不斷降低。通常，對於(yu) 內(nei) 徑為(wei) 4.6mm的色譜柱，其載樣量<50μg。如果是做方法轉移到其他色譜柱上，則需要調整進樣量，防止出現過載。

載樣量主要與(yu) 色譜柱固定相和待分析物的性質有關(guan) 。首先固定相類型不一樣，品牌不一樣會(hui) 造成載樣量較大的差異。其次待分析物質性質也會(hui) 直接影響到色譜柱載樣量。例如離子態的堿性化合物就很容易過載，不僅(jin) 無法達到<50μg的量級，有時候甚至1μg的量就能造成過載的現象。因此在常規疏水反相中，分子態的堿性化合物比離子態的堿性化合物有著更高的載樣量。目前的推測原因是，離子態間互相排斥作用使得待分析組分在固定相表麵更易達到飽和而造成過載。同時離子態的帶正電的堿性化合物也更容易和固定相中未鍵合的活性矽羥基發生次級相互作用。針對質量超載的問題，Z簡單的方法則是減少進樣量。

另外，混合樣品進樣中過載還會(hui) 導致峰保留時間的變化。

圖3

例如圖3中，A’，B’為(wei) AB組分單獨進樣時的保留分離情況。A，B為(wei) 混合進樣時的保留分離情況。過載的B不管是單獨進樣還是混合進樣，均保持穩定，而A由於(yu) 過量B的存在，在混合進樣時，保留時間提前。

雖然每個(ge) 成分的過載是相對獨立的，但是在混合樣品進樣過程中會(hui) 引起的分離度問題。這是由於(yu) 環境對組分的影響。其中某一組分過載很可能造成混合進樣時保留時間相對於(yu) 單獨進樣時有所改變。

體(ti) 積過載

進樣體(ti) 積太大通常會(hui) 導致較寬的平頭峰。
 

圖4

從(cong) 圖4可以看出，隨著進樣體(ti) 積的增大，峰寬逐漸變寬，峰分離度降低。

另外體(ti) 積過載還會(hui) 影響峰保留時間，體(ti) 積過載對保留時間短的組分影響更大，而對於(yu) 較後麵流出的峰影響較小。
 

圖5

圖5中虛線為(wei) 正常體(ti) 積進樣，實線色譜圖為(wei) 體(ti) 積過載後的色譜圖。

那麽(me) ，如何選擇合適的進樣體(ti) 積呢？
對於(yu) 在z佳流速下 ，允許樣品進樣的Z大體(ti) 積為(wei) ：

其中：L為(wei) 柱長（mm），dc為(wei) 內(nei) 徑（mm），dp為(wei) 粒徑（μm）

如果小夥(huo) 伴嫌棄公式太繁瑣，也沒有關(guan) 係，貼心的小編已經主動把我們(men) 常用的各規格色譜柱列出：
 

注：z大進樣體(ti) 積作了近似整數處理
盡管上表中各個(ge) 數據是嚴(yan) 格按照公式計算出來的，但是這個(ge) 數據並不。色譜是經驗科學，較之其他學科需要更多的實踐。當然，理論也為(wei) 我們(men) 指引了方向，讓我們(men) 能少走彎路。

各位小夥(huo) 伴想了解更多有關(guan) 色譜柱的知識，請谘詢月旭當地銷售人員。