液相日常應用三要素之——樣品

本文轉自：藥品質量研究本文轉載自“藥品質量研究”公眾(zhong) 號，作者：Yvette-葉

樣品、固定相（色譜柱）和流動相作為(wei) 液相日常分析的三要素，與(yu) 我們(men) 建立科學穩健的分析方法息息相關(guan) 。日常遇到的各種分析問題，除硬件外，無外乎這三者。

從(cong) 方法開發角度來說，從(cong) 頭設計，過程中解決(jue) 好這三者之間的關(guan) 係，一般都能設計一套適合的方法；從(cong) 重複（藥典）方法來說，理解好各個(ge) 要素的影響，就能解決(jue) 好過程中無法重現的問題。今天，我們(men) 就來談談液相日常應用三要素之一樣品。

1、樣品組成的考慮

比如，對於(yu) 以下結構：

極性小的組合：確保各組分能全部洗脫；

極性差異非常大的組合，綜合考慮，折中取舍，可選擇多套方法以同時滿足要求；

各化合物解離的程度與(yu) 疏水保留的關(guan) 係如下曲線所示：

上圖中，紅色方框中為(wei) 穩定保留區域，pKa附近，微小的pH變化都能導致保留時間較大的差異，對於(yu) 中性化合物來說，在整個(ge) pH範圍區間內(nei) 保留均較穩定。

2、樣品濃度的選擇

我們(men) 知道，對於(yu) 一個(ge) 藥品的雜質譜，其各個(ge) 雜質的限度是有差異的，根據ICH或者藥典標準，各已知雜質均有各自對應的限度。又因為(wei) 各個(ge) 雜質在確定的分析方法下響應不一致，故其定量限也是不一樣的。能否對每一個(ge) 雜質都能準確定量，取決(jue) 於(yu) 響應低的雜質是否滿足定量要求。若樣品濃度過低，在有關(guan) 物質（雜質）檢測中會(hui) 導致靈敏度不夠，無法滿足定量限低於(yu) 報告限的要求。

若濃度選擇過高，對於(yu) 主成分含量的測試，則導致方法學驗證中含量不呈線性；對於(yu) 有關(guan) 物質來說，特別是主峰後的一些雜質，會(hui) 因為(wei) 主成分拖尾而導致準確度無法滿足要求；另外，一般情況下，會(hui) 用流動相來進行稀釋，若主成分濃度太高，則會(hui) 改變供試品的溶液環境，使其中帶檢測的某一組分出峰與(yu) 其對照品有差異。

3、樣品稀釋劑的選擇

說到樣品的稀釋劑，這是咱們(men) 分析人員常碰到的問題，也是熟悉的問題。但凡做分析的小夥(huo) 伴，都能對溶劑效應道出個(ge) 123來。

對於(yu) 溶劑效應，小夥(huo) 伴們(men) 的di一反應肯定是在反相色譜分析過程中，由於(yu) 用純乙腈/純甲醇等高比例有機相溶解樣品，然後在進樣後發現色譜圖中處於(yu) 前麵的峰發生裂峰的問題。這是由於(yu) 供試品中的溶劑強度高於(yu) 流動相的關(guan) 係。解決(jue) 方式除了可以換稀釋劑外，還可以嚐試減少進樣量來進行改善。

另一種溶劑效應是由於(yu) 樣品的加入，導致供試品的pH和流動相的pH差異較大，導致流動相無法在短時間內(nei) 讓進樣的供試品達到平衡而導致出峰異常，包括峰形異常和出峰時間與(yu) 對照品有差異。

稀釋劑的選擇還可能會(hui) 造成鹽析。特別是對於(yu) 一些從(cong) 原料藥方法衍生而來的針對製劑的檢測方法。由於(yu) 製劑中輔料成分相對更加複雜，某些原料藥使用的稀釋劑可能會(hui) 讓製劑供試品產(chan) 生鹽析，導致出峰異常或者影響組分的回收率，影響檢測的重現性，甚至導致色譜柱及儀(yi) 器堵塞。

後一種情況則是由於(yu) 溶出等特殊情況，導致供試品溶液中有其他成分，如SDS等，幹擾測試，導致出峰異常；或者是由於(yu) 溶出液pH不一致，導致的出峰異常，這個(ge) 情況與(yu) 前述的pH不一致歸因一致。

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